透明骨骼標本製作

(http://leslieflora.blogspot.tw/2008/03/blog-post.html)
透明骨骼標本的製作是利用化學藥品、酵素及染劑， 對動物體的肌肉進行固定、退色透明，並將骨骼染色的過程。由於小型脊椎動物或是幼體，骨骼較脆弱或是尚未發育完全，所以製作透明骨骼標本是希望在不破壞動物整體的構造下，仍然可清楚看見動物體內軟骨和硬骨的分布。


材料：

10%甲醛溶液(脂化凝固)

蒸餾水(洗滌)

藍染劑(10mg alcian blue(艾爾遜藍)+80ml 95%alcohol+20ml 冰醋酸)(將軟骨染色)

95%alcohol(脫水脫脂)

90% alcohol(脫水脫脂)

40% alcohol(脫水脫脂)

15% alcohol(脫水脫脂)

酵素溶液(30ml飽和硼酸鈉溶液+70ml蒸餾水+1g trypsin(胰蛋白酶))(分解蛋白質)

(於冷藏庫保存；使用時置於室溫下。)

0.5%之KOH(使蛋白質膨脹透明)

紅染劑(alizarin red(茜素紅S)：冰醋酸：蒸餾水=1：2：12)(將硬骨染色)

0.5%KOH-甘油(3:1)(使蛋白質透明)

0.5%KOH-甘油(1:1)(使蛋白質透明)

0.5%KOH-甘油(1:3)(使蛋白質透明)

3%雙氧水(H2O2)(漂白)

甘油(透明及保存)

麝香草酚(Thymol)(防腐、防黴菌生長)



步驟：

1.將魚標本置於5-10%之甲醛溶液2-3天或更久(亦可直接進入第二步驟)。

2.用蒸餾水滴洗2-3天後，清理表面組織及內臟組織(切口愈小愈好)。

3.直接放置於藍染劑 24-48小時。

4.用95%alcohol浸泡2-3小時兩次。

5.依次用90% alcohol 處理2-3小時、40% alcohol 處理2-3小時、

15% alcohol處理2-3小時，直至標本沉下。

6.置於蒸餾水2-3小時直到標本下沉。

7.放置於酵素溶液中，但每隔2-3天溶液呈淺藍色時，

更換溶液，直至骨骼可清楚看見，同時表層肌肉無藍色存在。

8.將溶液換成0.5%之KOH溶液1-2天。

9.更換新的KOH溶液，並加數滴紅染劑，依標本大小而染色時間不同，

直至骨骼完全染紅為止。

10.依次轉換0.5%KOH-甘油溶液(3:1)、0.5%KOH-甘油溶液(1:1)、

0.5%KOH-甘油溶液(1:3)、直到純甘油。

(在最初之KOH-甘油溶液中每100ml可加3-4滴3%之雙氧水。)

11.將標本置於純甘油下保存，必要時加thymol來防霉防菌。


參考資料：

http://blog.yam.com/ctbioclub/article/5985647

http://www.sulps.ptc.edu.tw/new_page_5_4.htm

http://140.117.11.2/txtVersion/treasure/biology/M.855729376.D/M.847823054.A.html

http://fishdb.sinica.edu.tw/~fhfresh/6guard/6a4e_.htm